BLAST cambió hace ya algún tiempo a mejor con su versión BLAST+ pero por el camino se olvidó de algún detalle que puede confundir a más de uno.
El antiguo BLAST se ejecutaba con el comando 'blastall':
Blastall
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Blastall may be used to perform all five flavors of blast comparison. One
may obtain the blastall options by executing 'blastall -' (note the dash). A
typical use of blastall would be to perform a blastn search (nucl. vs. nucl.)
of a file called QUERY would be:
blastall -p blastn -d nr -i QUERY -o out.QUERY
The output is placed into the output file out.QUERY and the search is performed
against the 'nr' database. If a protein vs. protein search is desired,
then 'blastn' should be replaced with 'blastp' etc.
De esta forma un alineamiento de proteínas comenzaría como 'blastall -p blastp' y uno de ácidos nucleicos como 'blastall -p blastn' y si queremos usar MEGABLAST tenemos el comando diferente 'megablast'.
Sin embargo en la 'nueva' versión BLAST+, se separaron el alineamiento de proteínas y el de ácidos nucleicos en dos comandos: 'blastp' y 'blastn' (ver manual). Hasta aquí todo parece lógico y normal, lo que no todo el mundo sabe es que LA OPCIÓN POR DEFECTO DE BLASTN ES MEGABLAST, si ejecutamos 'blastn -help' encontraremos lo siguiente:
*** General search options
-task 'megablast' 'rmblastn' >
Task to execute
Default = `megablast'
Y es que no todo el mundo está interesado en la velocidad de búsqueda de alineamientos, muchos de los que todavía usamos Blastn es porque apreciamos su gran sensibilidad para detectar alineamientos. En la actualidad usamos Blast para alinear miles de secuencias en tiempos muy razonables de minutos e incluso segundos. Para ganar velocidad en alineamientos de millones de secuencias existen otras mejores alternativas como Bowtie2.
La CONCLUSIÓN de todo esto, si usamos Blastn y nos interesa la sensibilidad deberemos ejecutarlo como:
blastn -task blastn
Si lo hacemos sin añadir esta opción estaremos ejecutando MEGABLAST y correremos el peligro de perder una gran sensibilidad y no encontrar los alineamientos que deseamos. Por ejemplo, busquemos homología entre la 2'beta microglobulina humana (NM_004048.2) y la de ratón (NM_009735.3) usando la herramienta online de Blastn con las opciones por defecto ('Highly similar sequences (megablast)'):
La diferencia es considerable, ¿no creéis? pasamos de no encontrar similaritud a un alineamiento con E-valor de 1.5E-56!!!!
