13 de febrero de 2016

Expresión regular de la familia de las O-fucosiltransferasas



Hola, 
el pasado 8 de febrero se publicó en la revista Nature Chemical Biology  (http://dx.doi.org/10.1038/nchembio.2019) un artículo donde se  describen las bases moleculares de la reacción de O-fucosilación. Ésta es una modificación postraduccional poco frecuente, que realizan las enzimas O-fucosiltransferasas, como nos explica la investigadora de nuestro grupo Inmaculada Yruela, una de las autoras del trabajo [reseña completa en www.eead.csic.es]:

"Esta reacción resulta esencial en algunas rutas metabólicas de los organismos eucariotas, incluidas las plantas, para mantener las funciones básicas de las células. El artículo describe el mecanismo por el cual la enzima O-fucosiltransferasa 2 (POFUT2) reconoce sin errores una secuencia de aminoácidos (TSR) de la proteína receptora y le transfiere una molécula de azúcar tipo fucosa –así resulta fucosilada–. Hasta la fecha no se conocía cómo estas enzimas reconocen y se unen a sus sustratos proteicos. La O-fucosilación es esencial para el correcto plegamiento y estabilidad del dominio TSR y el reconocimiento molecular de POFUT2."
Como se ve en el alineamiento, el dominio TSR contiene tres puentes disulfuro y una secuencia consenso en torno a los dos primeras cisteínas CX{2,3}[S|T]CX{2}G , lo que se llama un motivo, como los del repositorio Prosite:
Fragmento de un alineamiento múltiple de dominios TSR, tomado de http://dx.doi.org/10.1038/nchembio.2019

Tras alinear algunas secuencias de ejemplo y perfeccionar la expresión regular, ésta se empleó para identificar todas las secuencias con dominios TSR en los proteomas de Homo sapiens y Caenorhabditis elegans. Más generalmente, el siguiente trozo de código permite localizar dentro de un fichero FASTA todas las secuencias reconocidas por una expresión regular:
 #!/usr/bin/perl  
 use strict;  
   
 # script that takes a FASTA file(s) and scans all protein sequences   
 # looking for matches of a chosen motif expressed as a regular expression  
 # 11042015: edited following comments by JF
   
 # constant as indices to access read_FASTA_file arrays  
 use constant NAME => 0;   
 use constant SEQ => 1;  
   
 #my $motifRE = '.*C[^C]{0,21}.C[^C]{2,6}[S|T].C[^C]{4,75}C[^C]C[^C]{4,15}C.*'; 
 my $motifRE = 'C[^C]{0,21}.C[^C]{2,6}[ST].C[^C]{4,75}C[^C]C[^C]{4,15}C';
   
 if(!@ARGV){ die "# usage: $0  ... \n"; }  
 else{ print "# motif: $motifRE\n"; }  
   
 my ($n_of_matches,@matches) = (0);  
 foreach my $infile (@ARGV)  
 {  
   next if($infile !~ /.fa/);  
   my (@FASTA,$start,$end,$l);  
   my $n_of_sequences = -1;  
   open(FASTA,"<$infile") || die "# cannot read $infile $!:\n";  
   while()  
   {  
    next if(/^$/);  
    if(/^\>(.*?)[\n\r]/)  
    {  
      $n_of_sequences++;   
      $FASTA[$n_of_sequences][NAME] = $1;  
    }                
    else  
    {  
      s/[-\s\n.]//g; #s/[\s|\n|\-|\.]//g;  
      $FASTA[$n_of_sequences][SEQ] .= $_;  
    }  
   }  
   close(FASTA);  
   
   foreach my $seq ( 0 .. $n_of_sequences )  
   {  
    while($FASTA[$seq][SEQ] =~ m/($motifRE)/gi)   
    {  
      #$start=length($`);  
      #$l=length($1);  
      #$end=$start+$l;  

      $start = $-[1];
      $end   = $+[1];
      $l     = $end - $start + 1;

      print ">$FASTA[$seq][NAME] match=($start,$end,$l)\n$1\n";           
    }  
   }  
 }  

Un saludo,
Inma y Bruno