11 de febrero de 2014

Jugando a leer y extraer secuencias de un fichero FASTQ comprimido con GZIP (.fq.gz)

Un fichero con extensión '.fq.gz' es un fichero en formato FASTQ comprimido en formato GZIP. Los ficheros FASTQ con datos de los nuevos métodos de secuenciación (NGS) suelen ocupar decenas de Gigabytes de espacio de disco (una cantidad indecente para la mayoría de los mortales) y comprimidos con GZIP se reducen.

Para empezar intentaremos saber cuanto espacio ocupa realmente un archivo 'fq.gz' comprimido, para ello usaremos el mismo comando 'gzip':

> gzip --list reads.fq.gz
         compressed        uncompressed  ratio uncompressed_name
        18827926034          1431825024 -1215.0% reads.fq


Parece que GZIP en vez de comprimir expande, pero no es verdad, simplemente que la opción '--list' de 'gzip' no funciona correctamente para archivos mayores de 2GB. Así que hay que recurrir a un método más lento y esperar unos minutos:


> zcat reads.fq.gz | wc --bytes
61561367168


Si queremos echar un vistazo al contenido del archivo podemos usar el comando 'less' o 'zless':

> less reads.fq.gz
> zless reads.fq.gz

Y para saber el número de secuencias que contiene simplemente hay que contar el número de líneas y dividir por 4 (le costará unos minutos):

> zcat reads.fq.gz | echo $((`wc -l`/4))
256678360

Podemos buscar una determinada secuencia en el archivo y contar cuántas veces aparece, por ej. ATGATGATG:

> zcat reads.fq.gz | awk '/ATGATGATG/ {nlines = nlines + 1} END {print nlines}'
398065

A veces nos interesará tomar un trozo del fichero para hacer pruebas, por ejemplo las primeras 1000 secuencias (o 4000 líneas):
> zcat reads.fq.gz | head -4000 > test_reads.fq
> zcat reads.fq.gz | head -4000 | gzip > test_reads.fq.gz

O extraer un rango de líneas (1000001-1000004):

> zcat reads.fq.gz | sed -n '1000001,1000004p;1000005q' > lines.fq 

También nos puede interesar dividir el fichero en varios más pequeños de por ejemplo 1 miĺlón de secuencias (o 4 millones de líneas):

> zcat reads.fq.gz | split -d -l 4000000 - reads.split
> gzip reads.split*
> rename 's/\.split(\d+)/.$1.fq/' reads.split*

Y posteriormente reunificarlos:

> zcat reads.*.fq.gz | gzip > reads.fq.gz


Finalmente os recomiendo leer un post similar en inglés:
http://darrenjw.wordpress.com/2010/11/28/introduction-to-the-processing-of-short-read-next-generation-sequencing-data/

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