recientemente he leído diferentes trabajos sobre cómo solamente una fracción de los tránscritos totales humanos realmente son codificantes. Estas observaciones tienen consecuencias prácticas que supongo se pueden extrapolar a otras especies.
1. Cómo identificar la isoforma principal de un gen
La base de datos APPRIS (http://appris-tools.org) aplica una serie de filtros para identificar las isoformas principales de cada gen humano en base a la combinación de varios criterios (leer artículo):
- conservación de la estructura de exones
- evolución no neutral
- alineamiento sin inserciones con estructuras homólogas
- conservación de residuos funcionales
- alineamiento completo con secuencias de otros vertebrados
Anotación de 3 isoformas según APPRIS, tomada de https://academic.oup.com/nar/article/46/D1/D213/4561658 |
Una vez hemos ensamblado tránscritos de uno o más tejidos o condiciones puede ser útil clasificarlos como codificantes o no. En un trabajo nuestro (leer aquí) lo hacíamos con CPC y el script transcripts2cdsCPP.pl de GET_HOMOLOGUES-EST. Ahora, un trabajo reciente (leer aquí) propone los siguientes criterios, que comento en algunos casos:
- El tránscrito debe abarcar al menos un intrón y tener un nivel de expresión > 1 tránscrito por millón (TPM).
- Si sólo comprende un exón debe expresarse al menos igual que los tránscritos mejor descritos (TPM > 13.87 en humanos).
- No debe estar contenido en otro tránscrito.
- Debe codificar un marco de lectura (ORF) de al menos 60 aminoácidos. OJO: esto podría dejar fuera proteínas pequeñas importantes.
- El ORF no debe solapar con elementos repetidos/transposones (LINe, LTR, etc) ni loci rRNA.
- El E-valor producido por BLASTX al comparar el transcrito con proteínas de mamíferos en GenBank y UniProt debe ser < 10E-15. OJO: el E-valor cambiará a medida que crezcan las bases de datos, este criterio debería expresarse mejor como cobertura o bit score. Ver siguiente criterio.
- El mejor ORF del tránscrito debe alinear al menos el 75% de otras proteínas conocidas, para eliminar pseudogenes, que suelen estar truncados.
- Si dos tránscritos de hebras contrarias solapan, nos quedaremos con el que se parezca a proteínas con función conocida.
Bruno
Un artículo relacionado:
ResponderEliminarhttps://academic.oup.com/nar/advance-article/doi/10.1093/nar/gky587/5047265
https://www.biorxiv.org/content/early/2018/07/02/360602
ResponderEliminarhttps://academic.oup.com/nar/article/46/14/7070/5047265
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